| LA AGREGACION DE ALFA-SINUCLEINA SE HA RELACIONADO POR VARIOS AUTORES CON LA ENFERMEDAD DE PARKINSON. RECIENTEMENTE, SE HA EVIDENCIADO POR ESTUDIOS IN VITRO QUE LA DOPAMINA AL OXIDARSE INDUCE LA AGREGACION DE ALFA-SINUCLEINA A ESTRUCTURAS PROTOFIBRILARES NEUROTOXICAS, INHIBIENDO LA FORMACION DE FIBRAS DE ALFA-SINUCLEINA, MECANISMO QUE SE HA RELACIONADO CON LA DETOXIFICACION DE LAS PROTOFIBRAS. ANTECEDENTES SUGIEREN QUE ES EL AMINOCROMO, UN DERIVADO DE LAñoXIDACION DE LA DOPAMINA, EL RESPONSABLE DE ESTAS ACCIONES. SIN EMBARGO, TODOS LOS EXPERIMENTOS CON AMINOCROMO HAN SIDO REALIZADOS EN PRESENCIA DE DOPAMINA Y AGENTES OXIDANTES. EN ESTA TESIS SE INTENTO DEMOSTRAR POR ESTUDIOS IN VITRO QUE: (I) EL AMINOCROMO PURO PUEDE INDUCIR LA AGREGACION DE ALFA-SINUCLEINA A PROTOFIBRAS, INHIBIENDO LA FORMACION DE FIBRAS. (II) LA REDUCCION DE ESTE AMINOCROMO POR LA ENZIMA DT-DIAFORASA ES UN MECANISMO PROTECTOR QUE PREVIENE LA FORMACION DE PROTOFIBRAS DE ALFA-SINUCLEINA. EN ESTA TESIS SE DESARROLLO UN METODO NUEVO PARA PURIFICAR AMINOCROMO USANDO CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO. PARA DEMOSTRAR QUE EL AMINOCROMO FUE SEPARADO DE DOPAMINA Y AGENTES OXIDANTES, USAMOS ESPECTROSCOPIA UV-VISIBLE Y 1H-NMR. EL AMINOCROMO SE INCUBO CON ALFA-SINUCLEINA EN DISTINTAS CONDICIONES, OBSERVANDO: (I) AGREGACION DE ALFA-SINUCLEINA A ESTRUCTURAS OLIGOMERICAS (PROCURSORAS DE PROTOFIBRAS) POR WESTERN BLOT, MICROSCOPIA ELECTRONICA Y DICROISMO CIRCULAR Y (II) INHIBICION DE FIBRILACION DE ALFA-SINUCLEINA, DETERMINADO POR FLUORESCENCIA CON TIOFLAVINA T, DICROISMO CIRCULAR Y MICROSCOPIA ELECTRONICA. FINALMENTE, SE INCUBO AMINOCROMO Y ALFA-SINUCLEINA EN PRESENCIA DE DT-DIAFORASA Y SE OBSERVO INHIBICION DE LA AGREGACION DE ALFA-SINUCLEINA TANTO AñoLIGOMEROS COMO A FIBRAS. ESTA INHIBICION DE LA AGREGACION DE ALFA-SINUCLEINA FUE DETERMINADO POR WESTERN BLOT, MICROSCOPIA ELECTRONICA, FLUORESCENCIA CON TIOFLAVINA T Y DICROISMO CIRCULAR. ADEMAS, SE DEMOSTRO QUE AL REDUCIR AMINOCROMO CON UN ELECTRON POR OTRA FLAVOENZIMA SOLO SE DISMINUYO LEVEMENTE LA AGREGACION DE ALFA-NINUCLEINA INDUCIDA POR AMINOCROMO. |