| LOS HEMICANALES (HCS) Y CANALES DE UNION EN HENDIDURA (CUH) FORMADOS POR LA CONEXINA32 (CX32) SON EXPRESADOS POR VARIOS TIPOS CELULARES, DONDE JUEGAN UN PAPEL RELEVANTE COMO VIAS DE COMUNICACION CELULAR TANTO EN CONDICIONES FISIOLOGICAS COMO PATOLOGICAS. SE HA PROPUESTO QUE, EN CONDICIONES PATOLOGICAS, LOS CUH FAVORECEN LA PROPAGACION DE SEÑALES DE MUERTE DESDE CELULAS MAS AFECTADAS A LAS MAS RESISTENTES, MIENTRAS QUE EL AUMENTO DE ACTIVIDAD DE LOS HEMICANALES ACELERARIA LA MUERTE CELULAR. EN ESTA TESIS SE EVALUO SI CONDICIONES QUE SIMULAN UN EPISODIO DE ISQUEMIA-REPERFUSION, COMO SON LA INHIBICION METABOLICA (IM) Y LA EXPOSICION TRANSITORIA A UNA SOLUCION SIN OXIGENO Y GLOCOSA (SOG), AFECTAN LA ACTIVIDAD DE LOS HCS Y CUH FORMADOS POR LA CX32 (HCS-CX32 Y CUH-CX32, RESPECTIVAMENTE). ADEMAS, SE IDENTIFICO POSIBLES VIAS INTRACELULARES QUE EXPLICAN LOS CAMBIOS EN LA ACTIVIDAD DE LOS CANALES, SE IDENTIFICO UN BLOQUEADOR DE HCS QUE NO AFECTA LOS CUH Y SE DEMOSTRO LA PARTICIPACION DE LOS HCS-CX32 EN LA MUERTE CELULAR INDUCIDA POR SOG. PARA EVITAR LA PARTICIPACION DE OTROS CANALES DE MEMBRANA EN LA RESPUESTA CELULAR DE INTERES, SE UTILIZO CELULAS HELA, QUE NO EXPRESAN CXS ENDOGENAS, TRANSFECTADAS CON LA CX32 DE RATON (HELA-CX32) Y LAS CELULAS PARENTALES (HELA-P) SE USARON COMO CONTROL NEGATIVO. EN HELA-CX32 PERO NO EN HELA-P, LA IM INDUJO PERMEABILIZACION CELULAR MEDIADA POR HCS Y AUMENTO LA CORRIENTE MACROSCOPICA DE LA MEMBRANA CELULAR. CONCORDANTEMENTE, EL EFECTO DE LA IM FUE BLOQUEADO CON INHIBIDORES DE LOS HCS. LA CONDUCTANCIA UNITARIA DE LOS HCS (90 PS) NO SE MODIFICO DURANTE LA IM Y EL AUMENTO EN LA ACTIVIDAD DE LOS HCS SE CORRELACIONO DIRECTAMENTE CON UN INCREMENTO EN LOS NIVELES DE HCS-CX32 PRESENTE EN LA SUPERFICIE CELULAR. EL AUMENTO EN ACTIVIDAD DE LOS HCS FUE PRECEDIDO POR UN RAPIDO INCREMENTO EN LA [CA2+]I, QUE FUE PREVENIDO CON BLOQUEADORES DE LOS HCS O LA EXPOSICION A UNA SOLUCION SIN CATIONES DIVALENTES, REVELANDO QUE EL AUMENTO EN LA [CA2+]I OCURRE PRINCIPALMENTE POR INGRESO DE CA2+. CONSECUENTEMENTE, EL AUMENTO EN LA ACTIVIDAD DE LOS HCS DEBERIA FAVORECER EL INCREMENTO EN LA [CA2+]I INDUCIDO POR LA IM. LA EXPOSICION TRANSITORIA A UNA SOLUCION SOG AUMENTO LA ACTIVIDAD DE LOS HCS-CX32, RESPUESTA QUE FUE INHIBIDA CON BLOQUEADORES DE HCS. EL EFECTO DE LA IM SOBRE LOS HCS FUE RESISTENTE A AGENTES ANTIOXIDANTES, PARCIALMENTE PREVENIDA CON LA INHIBICION DE LA CINASA P38 MAPK Y EMULADA CON ACIDO ARAQUIDONICO. ADEMAS, LA IM DISMINUYO EL ACOPLAMIENTO INTERCELULAR VIA CUH, LO QUE SE ASOCIO CON UNA DISMINUCION DE LA REACTIVIDAD DE LA CX32 EN LAS PLACAS DE UNION SIN CAMBIOS EN SUS NIVELES TOTALES. EL EFECTO NO SE PREVINO O REVIRTIO CON AGENTES ANTIOXIDANTES, SUGIRIENDO QUE LA DISMINUCION DE LA COMUNICACION CELULAR FUE CONSECUENCIA DE UNA DISMINUCION DEL NUMERO DE CUH Y NO DE UNAñoXIDACION DE ESTOS. LA EXPOSICION A UNA SOLUCION SOG TAMBIEN INDUJO DESACOPLAMIENTO CELULAR, PERO CON MENOR INTENSIDAD QUE LA IM. ADEMAS, SE IDENTIFICO A BOLDINA COMO EL PRIMER BLOQUEADOR DE HCS QUE NO AFECTA LOS CUH. BOLDINA BLOQUEO LOS HCS-CX32 TANTO EN CELULAS BAJO IM, CONDICION QUE GENERA AGENTES RADICALARIOS DERIVADOS DEL OXIGENO Y NITROGENO Y EN CELULAS BAÑADAS CON UNA SOLUCION SIN CATIONES DIVALENTES, CONDICION QUE ACTIVA LOS HCS PERO NO GENERA AGENTES RADICALARIOS OXIDANTES. EL EFECTO INHIBITORIO SOBRE LOS HCS FUE DEPENDIENTE DE LA CONCENTRACION DE BOLDINA Y FUE CX INESPECIFICO. BOLDINA BLOQUEO LOS HCS FORMADOS POR CXS QUE NO PRESENTAN RESIDUOS DE CISTERNA EN SU EXTREMO C-TERMINAL, CX45 Y CX43 TRUNCADA EN EL AMINOACIDO 251, LO QUE SUGIERE QUE SU EFECTO INHIBITORIO SOBRE LOS HCS NO SE EXPLICARIA POR UNA ACCION ANTIOXIDANTE SOBRE LOS RESIDUOS DE CISTEINA PRESENTES EN EL C-TERMINAL DE OTRAS CXS. ADEMAS, BOLDINA NO PREVINO LA CAIDA DEL POTENCIAL MEMBRANA MITOCONDRIAL NI EL AUMENTO DE NO DURANTE LA IM, SUGIRIENDO QUE EL BLOQUEO DE LOS HCS NO SE EXPLICARIA POR UNA ACCION A NIVEL MITOCONDRIAL O NEUTRALIZANTE DE NO. FINALMENTE, SE DEMOSTRO QUE LA EXPOSICION TRANSITORIA A UNA SOLUCION SOG INDUCE MORTALIDAD CELULAR, LA QUE FUE PREVENIDA POR OLEAMIDA, BLOQUEADOR DE HCS Y CUH, Y POR BOLDINA, BLOQUEADOR SOLO DE HCS, REVELANDO EL PAPEL DE LOS HCS SOBRE EL SUPUESTO PAPEL DE CUH COMO MEDIADORES DE LA PROGRESION Y/O PROPAGACION DE LA MUERTE CELULAR INDUCIDA POR ISQUEMIA-REPERFUSION EN UNA COMUNIDAD CELULAR. POR ESTO, SE PROPONE A LOS HCS COMO UN BLANCO TERAPEUTICO PARA CONTROLAR LAS PERSPECTIVAS DE VIDA EN SITUACIONES QUE INVOLUCREN ISQUEMIA-REPERSUSION. |