| EN LA ACTUALIDAD, SE SABE QUE LOS CANALES DE IONES INTERACTUAN CON MULTIPLES PROTEINAS DE SEÑALIZACION Y COMPONENTES DEL TRAFICO INTRACELULAR, INCLUYENDO MOLECULAS DEL CITOESQUELETO, QUINASAS REGULATORIAS, FOSFATASAS Y MOLECULAS DE LA MATRIZ EXTRACELULAR, COMO PARTE DE GRANDES COMPLEJOS MULTI-PROTEICOS, ENTRE LOS QUE TAMBIEN SE ENCUENTRAN OTROS CANALES Y PROTEINAS ACCESORIAS QUE REGULAN SU FUNCION (SUBUNIDADES BETA). UNO DE LOS S MAS NOTABLES POR SU IMPORTANCIA FISIOPATOLOGICA LO CONSTITUYE LA MODIFICACION DE LA ACTIVIDAD DEL CANAL DE K+ DE ALTA CONDUCTANCIA (MAXIK O BK) POR SUS SUBUNIDADES BETA ACCESORIAS. LA MANERA COMO ESTAS SUBUNIDADES REALIZAN SU TAREA Y SE ACOPLAN FUNCIONALMENTE, PARA EL CASO DE LOS CANALES BK, ESTA COMENZANDO A ESCLARECERSE. PERO UN PROCESO QUE SUBYACE AL ACOPLAMIENTO FUNCIONAL, Y QUE SOLO RECIENTEMENTE HA COMENZADO A ESTUDIARSE, ES LA UNION FISICA ENTRE ESTAS SUBUNIDADES. LA INTENCION DE ESTE PROYECTO FUE ESTUDIAR LAS REGIONES DE LA SUBUNIDAD BETA QUE PERMITEN SU UNION FISICA A LA SUBUNIDAD ALFA DEL CANAL BK. PARA ELLO SE PROCEDIO A BUSCAR UN EPITOPE APROPIADO PARA PODER DETECTAR LAS SUBUNIDADES BETA MEDIANTES WESTERN BLOT. EL EPITOPE 3XFLAG ADICIONADO EN EL EXTREMO CARBOXILO TERMINAL DE LAS SUBUNIDADES HBETA2 Y MBETA1 NO ALTERO LA FUNCIONALIDAD DE ESTAS PROTEINAS Y PERMITIO TANTO SU DETECCION MEDIANTE WESTERN BLOT COMO LA REALIZACION DE ENSAYOS DE CO-INMUNOPRECIPITACIONES ENTRE LAS SUBUNIDADES ALFA Y BETA DEL CANAL BK. POSTERIORMENTE, SE UTILIZO UNA ESTRATEGIA DE ELIMINACION SELECTIVA DE RESIDUOS AMINOACIDICOS (SUPRESIONES DE EXONES) DE LA SUBUNIDAD HBETA2 PARA TRATAR DE DEVELAR LOS DOMINIOS QUE PERMITEN QUE LA SUBUNIDAD BETA SE UNA A LA SUBUNIDAD ALFA, EVALUANDOSE LA CAPACIDAD DE UNION ENTRE LAS SUBUNIDADES MEDIANTE COINMUNOPRECIPITACION. LA SUPRESION DE LAS REGIONES CODIFICADAS POR LOS EXONES 3 Y 4 PRODUJO SUBUNIDADES BETA TRUNCADAS QUE MANTUVIERON SU CAPACIDAD DE UNION A LA SUBUNIDAD ALFA. ESTO PODRIA SEÑALAR QUE LAS REGIONES CODIFICADAS POR LOS EXONES 3 Y 4 DE LAS SUBUNIDADES HBETA 2 NO SON ESENCIALES PARA SU UNION FISICA A LA SUBUNIDAD ALFA DEL CANAL PERO, NO FUE POSIBLE DESCARTAR LA POSIBILIDAD DE QUE TODAS LAS REGIONES DE LA SUBUNIDAD BETA PARTICIPAN EN LA UNION, PUES LA SUBUNIDAD HBETA2 CARENTE DE LA REGION CODIFICADA POR EL EXON 2 (HBETA2-2-3XFLAG) NO PUDO SER DETECTADO POR WESTERN BLOTTING AL TRANSFECTARLO EN CELULAS HEK293T. ESTOS RESULTADOS PROPORCIONAN NUEVAS EVIDENCIAS PARA LA DEFINICION MOLECUALR DE LAS REDES DE INTERACCION ENTRE LAS SUBUNIDADES ALFA Y BETA DEL CANAL BK. |