| EL GENERO SALMONELLA INCLUYE TRES ESPECIES, S. BONGORI Y S. ENTERICA, DONDE LA ULTIMA SE DIVIDE EN SEIS SUBESPECIES, LAS QUE A SU VEZ CONTIENEN MUCHOS SEROVARES. LAS SECUENCIAS DE LOS GENOMAS DE LOS SEROVARES MAS CERCANAMENTE RELACIONADOS DE S. ENTERICA SUBESP. ENTERICA DIFIEREN EN INSERCIONES/DELECIONES DENOMINADAS ISLAS GENOMICAS. LAS ISLAS DE PATOGENICIDAD REPRESENTAN UN SUBCONJUNTO DE LAS ISLAS GENOMICAS Y PRESENTAN LA CARACTERISTICA ADICONAL DE CODIFICAR PARA FACTORES DE VIRULENCIA. LA INFECCION DE S. ENTERICA COMIENZA CON LA INGESTION DE AGUA Y ALIMENTOS CONTAMINADOS. LUEGO, SL. ENTERICA INVADE LAS CELULAS DEL EPITELIO INTESTINAL Y UN GRUPO DE SEROVARES PUEDE ENTRAR EN EL TORRENTE SANGUINEO DEL HOSPEDERO PARA DISEMINARSE EN ORGANOS PROFUNDOS COMO EL HIGADO O EL BAZO, PRODUCIENDO SEPTICEMIA. S. TYPHI, EL PATOGENO QUE PRODUCE FIEBRE TIFOIDEA SOLO EN HUMANOS, COMPARTE CON OTROS SEROVARES MUCHOS DE LOS GENES REQUERIDOS PARA LA VIRULENCIA. SIN EMBARGO, DEBIERA TAMBIEN TENER GENES NECESARIOS PARA DETERMINAR SU ESPECIFICIDAD DE HOSPEDERO. LOS GENES PRESENTES EN LAS ISLAS GENOMICAS COMPARTIDAS ENTRE LOS SEROVARES DE S. ENTERICA QUE CAUSAN INFECCIONES SISTEMICAS EN LOS HOSPEDEROS HUMANOS, Y AUSENTES DE LOS SEROVARES QUE NO CAUSAN DICHO TIPO DE INFECCION, SON CANDIDATOS PARA CODIFICAR GENES DETERMINANTES DE LA ESPECIFICIDAD DE HOSPEDERO EN S. TYPHI, ANALISIS COMPARATIVOS DE LAS SECUENCIAS DE LOS GENOMAS DE S. TYPHI MUESTRAN QUE ESTE SEROVAR TIENE MUCHAS ISLAS GENOMICAS QUE ESTAN PRESENTES SOLO EN UN REDUCIDO GRUPO DE SEROVARES. UNA DE ESTAS ISLAS PEQUEÑAS INCLUYE SOLO DOS MARCOS DE LECTURA, CORRESPONDIENTES A LOS GENES STY1498 (HLYE) Y STY1499. LA SECUENCIA DEL PRODUCTO PREDICHO PARA EL GEN HLYE COMPARTE MAS DEL 90 POR CIENTO DE IDENTIDIDAD CON LA HEMOLISINA HLYE (CLYAño SHEA) DE 34 KDA DE E. COLI K12, MIENTRAS QUE STY1499 CODIFICARIA PARA UNA PROTEINA QUE COMPARTE UN 67 POR CIENTO DE IDENTIDIDAD CON UNA HISTIDINA KINASA DE YERSINIA BERCOVIERI, HLYE ES UNA HEMOLISINA FORMADORA DE POROS QUE SE ACUMULA EN EL CITOPLASMA DE E. COLI. ESTA HEMOLISINA SE EXPORTA MEDIANTE VESICULAS DE MEMBRANA EXTERNA Y SE HA PROPUESTO UN MODELO QUE REQUIERE DEL ENSAMBLAJE DE 13 MONOMEROS CON UNA REGION HIDROFOBICA EXPUESTA, LA CUAL PUEDE SER CRITICA PARA LA INSERCION EN LA MEMBRANA. POR OTRA PARTE, SE HA ENCONTRADO ORTOLOGOS DEL GEN HLYE EN LOS SEROVARES ESPECIFICOS DE HUMANO TYPHI Y PARATYPHI A, PERO NO EN OTROS SEROVARES, INCLUYENDO S. TYPHIMURIUM. A PESAR DE QUE HLYE DE SLAMONELLA PRESENTA ACTIVIDAD FORMADORA DE POROS, S. TYPHI NO PRESENTA HEMOLISIS EN PLACAS DE AGAR SANGRE, CON LA EXCEPCION DE TY21A. LA PROTEINA HLYE ES CAPAZ DE LISAR CELULAS EPITELIALES CUANDO SE ENCUENTRA PRESENTES EN ALTAS CONCENTRACIONES, PERO LA MISMA PROTEINA PUEDE AFECTAR LA HOMEOSTASIS DE CA2+ EN CELULAS EPITELIALES, INDUCIENDO LENTAS OSCILACIONES DE [CA2+] INTRACELULARES CUANDO SE PRESENTA EN BAJAS (SUBLITICAS) CONCENTRACIONES. A PESAR DE TODOS ESTOS RESULTADOS, NO SE HA DETERMINADO EL PAPEL DE HLYE EN VIRULENCIA. EN ESTE TRABAJO, SE HIPOTETIZO QUE LA REGION GENOMICA LLAMADA SPI-18 CONTIENE AL MENOS UN GEN QUE PARTICIPA EN LA PATOGENICIDAD DE S. TYPHI, POR LO QUE SPI-18 CORRESPONDERIA A UNA ISLA DE PATOGENICIDAD. EN ESTA TESIS, SE EXAMINO LA DISTRIBUCION DEL GEN HLYE EN LOS SEROVARES PETENECIENTES A LA COLECCION SARB (SALMONELLA ENTERICA) Y A LAS CEPAS PERTENECIENTES A LA COLECCION STH (SALMONELLA TYPHI). EXPERIMENTOS DE PCR MOSTRARON QUE LA SPI-18 ESTA PRESENTE EN S. TYPHI Y EN MUCHOS OTROS SEROVARES DE LA COLECCION SARB. ADEMAS, FUE POSIBLE DETECTAR LA HEMOLISIS DEPENDIENTE DE HLYE LUEGO DE DESESTABILIZAR LA ENVOLTURA BACTERIANA CON FAGOS, AMPLICILINA Y CON LA MUTACION OMPA. POR OTRA PARTE, CASI TODOS LOS SEROVARES DE LA COLECCION SARB QUE SE HAN DESCRITO COMO CAUSANTES DE INFECCIONES SISTEMICAS EN HUMANOS TIENEN SPI-18 Y HLYE, Y EXPRESAN UNA HEMOLISINA ACTIVA LUEGO DE HABER DESESTABILIZADO LA ENVOLTURA BACTERIANA. ADEMAS, SE ENCONTRO QUE LA FUNCION CODIFICADA EN HLYE CONSTRIBUYE A LA INVASION DE CELULAS EPITELIALES IN VITRO EN S. TYPHI, Y CONTRIBUYE A LA COLONIZACION DE ORGANOS PROFUNDOS COMO EL HIGADO Y EL BAZO CUANDO SE EXPRESA DE FORMA HETEROLOGA EN S. TYPHIMURIUM. POR LO TANTO, HLYE REPRESENTA UN FACTOR DE VIRULENCIA. EN ANALISIS DE EXPRESION, SE ENCONTRO QUE HLYE PRESENTA UN AUMENTO EN LA EXPRESION EN FASE ESTACIONARIA, ALTAñoSMOLARIDAD Y PH ACIDO, DONDE ESTA ACTIVACION DEPENDE DEL REGULADOR GLOBAL DE ESTRES RPOS. ADEMAS, SE ENCONTRO QUE EL REGULADOR TRANSCRIPCIONAL CRP REPRIME LA TRANSCRIPCIN DE HLYE. AMBOS REGULADORES SE HAN DESCRITO COMO CRITICOS EN LA EXPRESION DE VARIOS FACTORES DE VIRULENCIA. TODOS ESTOS RESULTADOS DEMUESTRAN QUE LA HLYE ES UN NUEVO DETERMINANTE DE VIRULENCIA EN S. TYPHI, LO CUAL ESTABLECE QUE EFECTIVAMENTE SPI-18 ES UNA ISLA DE PATOGENICIDAD. |