| EL FACTOR DE TRANSCRIPCION RUNX2 ES ESENCIAL PARA EL DESARROLLO OSEO Y LA DIFERENCIACION OSTEOBLASTICA, YA QUE CONTROLA DIRECTAMENTE LA EXPRESION DE DIVERSOS GENES RELACIONADOS CON ESTE FENOTIPO, SIRVIENDO COMO UN REGULADOR MAESTRO DE LA ESQUELETOGENESIS. RUNX2 PRESENTA DOS ISOFORMAS CUYA EXPRESION ES REGULADA A TRAVES DE DOS PROMOTORES DISTINTOS. LA ISOFORMA FUNX2-II/P57 ES CONTROLADA POR EL PROMOTOR P1 Y ES LA ISOFORMA PREDOMINANTE EN CELULAS OSEAS. CUANDO CELULAS PLURIPOTENCIALES MESENQUIMALES SON INCUBADAS CON MORFOGENOS COMO BMP-2 HAY UN COMPROMISO DE ESTAS CON EL LINEAJE OSTEOBLASTICO EXHIBIENDO UN AUMENTO DE LA EXPRESION DE RUNX2-II/P57 Y DE LOS GENES REGULADOS POR ESTA ISOFORMA. ESTA ELEVADA EXPRESION DE RUNX2 ES ACOMPAÑADA POR UN REMODELAMIENTO CROMATINICO EN LA REGION PROMOTORA P1, PROCESO QUE ES INDEPENDIENTE DE LA ACTIVIDAD REMODELADORA DE CROMATINA DE COMPLEJOS DEL TIPO SWI/SNF. POR ELLO SE HA PROPUESTO QUE ESTA REMODELACION CROMATINICA PODRIA ESTAR SIENDO MEDIADA POR OTROS MECANISMOS EPIGENETICOS COMO LAS MODIFICACIONES COVALENTES DE LAS HISTONAS. DE ESTE MODO RESULTA RELEVANTE EVALUAR LOS MECANISMOS MOLECULARES INVOLUCRADOS EN EL CONTROL DE EXPRESION DEL GEN RUNX2-II/P57, ESPECIFICAMENTE, LA PARTICIPACION DE MODIFICACIONES COVALENTES DE LAS HISTORIAS H3 Y H4 EN LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DEL PROMOTOR P1 DEL GEN RUNX2, ASI COMO TAMBIEN DE FACTORES DE TRANSCRIPCION Y COACTIVADORES ASOCIADOS A ESTE PROCESO. EN ESTA TESIS HEMOS DEMOSTRADO QUE UN PATRON ESPECIFICO DE MODIFICACIONES POST-TRADUCCIONALES EN LAS HSIOTONAS H3 Y H4 SE ENCUENTRA PRESENTE EN LA REGION PROMOTORA PROXIMAL P1 Y QUE ESTE PATRON, ESTA ASOCIADO A LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DEL GEN RUNX2 EN CELULAS OSTEOBLASTICAS. ESTAS MARCAS EPIGENETICAS INCLUYEN UN AUMENTO EN LA ACETILACION DE LA HISTONA H3 EN EL RESIDUO DE LISINA 9 (H3K9)Y EN LA TRIMETILACION EN H3K4. EN CONTRASTE, EN CELULAS QUE NO EXPRESAN EL GEN RUNX2 ENCONTRAMOS MONO, DI Y TRIMETILACION DE H3K9, MONOMETILACION DE H3K4, TRIMETILACION DE H3K27, ASI COMO TAMBIEN AUMENTO DE LA ACETILACION DE LA HISTONA H4, ESPECIFICAMENTE EN EL RESIDUO DE LISINA 12 (K12) Y DIMETILACION SIMETRICA DE H2R3. ESTO TAMBIEN FUE OBSERVADO EN CELULAS PRIMARIAS DIFERENCIADAS EX VIVO Y EN LA LINEA CELULAR MESENQUIMAL PLURIPOTENCIAL C3H10T1/2 ESTIMULADA CON BMP-2. EN ESTAS ULTIMAS, NUESTROS RESULTADOS SUGIEREN LA PRESENCIA DE "DOMINIOS BIVALENTES" EN EL PROMOTOR P1 EN ESTADOS TEMPRANOS DE DIFERENCIACION. JUNTO A LO ANTERIOR EN ESTA TESIS ANALIZAMOS LA PARTICIPACION DEL FACTOR DE TRANSCRIPCION C/EBPBETA EN LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DEL GEN RUNX2, DETERMINANDO QUE C/EBPBETA ES CAPAZ DE REGULAR LA TRANSCRIPCION DEL PROMOTOR P1, PRINCIPALMENTE, A TRAVES DE UN SITIO DE INTERACCION PRESENTE EN LA REGION -161/-148. ESTO FUE OBSERVADO TANTO PARA LA ISOFORMA LAP* COMO LAP, MIENTRAS QUE LA ISOFORMA LIP, SE COMPORTO COMO DOMINANTE NEGATIVO DE LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL MEDIADA POR LAS OTRAS DOS SOFORMAS. DEL MISMO MODO, AL ANALIZAR LA PARTICIPACION DEL COACTIVADOR P300, DETERMINAMOS QUE ESTE CONTRIBUYE DE MANERA POSITIVA A LA REGULACION TRANSCRIPCIONAL DEL PROMOTOR P1. EN RESUMEN, NUESTROS RESULTADOS NOS PERMITEN POSTULAR QUE LA TRANSCRIPCION Y EL REMODELAMIENTO CROMATINICO DEL PROMOTOR P1 DEL GEN RUNX2 DURANTE LA DIFERENCIACION OSTEOBLASTICA, ESTAN REGULADOS POR MECANISMOS EPIGENETICOS ASOCIADOS A MODIFICACIONES COVALENTES DE HISTONAS H3 Y H4. ESTE PROCESO PODRIA ESTAR SIENDO MEDIADO POR EL FACTOR DE TRANSCRIPCION C/EBPBETA Y POR LA PROTEINA CON ACTIVIDAD ACETILTRANSFERASA DE HISTONAS P300. |